Питательный агар для выделения листерий среда пал. Инструкция по применению набора реагентов для бактериологических исследований «Питательный агар для выделения листерий (Среда ПАЛ)
П редназначен для выделения возбудителя листериоза из пищевых продуктов при их бактериологическом исследовании, клинического патологического материала человека и животных, санитарных посевов из объектов внешней среды, а также для культивирования музейных, производственных штаммов и культур, выделенных на обогатительных средах. Компонентный состав высоко селективен ввиду присутствия в нем добавок хлорида лития, цефтазидима, полимиксина В и акрифлавина.
Дифференцирующая способность среды обусловлена использованием 2 индикаторных систем: с эскулином и маннитом.
Дифференциально-диагностическая среда, на которой Listeria monocytogenes гидролизует эскулин на эскулетин и глюкозу. Реагируя с цитратом железа, эскулетин образует коричнево-черный комплекс, что приводит к потемнению среды вокруг колоний. Листерии не ферментируют маннит, поэтому сбраживающие маннит энтерококки и стафилококки формируют цветные колонии (от красного до желтого). Микроаэрофильные условия ограничивают рост аэробов, подобных представителям родов Bacillus и Pseudomonas.
Введение в состав среды яичного желтка (2,5%) способствует восстановлению поврежденных клеток. Добавление среды с кровью поверх PALCAM агара позволяет дифференцировать и подсчитать количество гемолитических листерий.
В зависимости от типа анализируемой пробы перед высевом на PALCAM агар должно быть проведено обогащение в том или ином бульоне для селективного обогащения
Состав среды: панкреатический гидролизат рыбной муки, панкреатический гидролизат казеина, натрий хлористый, пептон мясной, дрожжевой экстракт, литий хлористый, эскулин, железо лимонноамиачное зеленое или коричневое, натрий углекислый, натрий хлористый, агар, селективная добавка.
В виде гомогенного сухого, легко растворимого порошка светло-желтого цвета, светочувствителен.
Селективная добавка в виде мелкодисперсного порошка светло-розового цвета, светочувствительный.
Готовая среда желто-зеленого цвета, прозрачна, со слегка опалесцирующей поверхностью, по плотности соответствует 1,3% агаровому гелю.
Кислотность среды: при 25°С водный раствор (6,9% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.
Инструкция по применению питательного агара для выделения листерий ПАЛ.Инструкция составлена на основе ГОСТ-Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocyto-genes».
Питательный агар ПАЛ является селективно-диагностической средой и предназначен для выявления колоний бактерий Listeria monocytogenes.
ФОРМА ВЫПУСКА:
Среда выпускается в герметично укупоренных стеклянных флаконах по 200 и 400 мл. Селективная добавка к агару ПАЛ выпускается в укупоренных пенициллиновых флаконах и рассчитана 1 литр среды.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ СРЕДЫ:
В асептических условиях вскрыть флакон и заменить резиновую пробку флакона на стерильную ватно-марлевую. Расплавить среду на водяной бане (не кипятить!), охладить до 48 – 50 °С, добавить селективную добавку, согласно инструкции по применению добавки, и разлить в стерильные чашки Петри. Среда готова к применению.
ТЕХНИКА ИССЛЕДОВАНИЯ:
Посев на среду ПАЛ производят из пробирок с селективной средой для обогащения (ПБЛ II или бульон Фразера) после инкубации, независимо от наличия или отсутствия признаков роста, в том числе почернения. Посев производят бактериологической петлей из культуральной жидкости на поверхность агара. Посевной материал распределяют по поверхности шпателем или наносят петлей в виде штриха. Допускается проводить пересев параллельно на поверхность двух плотных селективно-диагностических сред (например, можно использовать дополнительно ПАЛКАМ-агар или Оксфордский агар).
Посевы инкубируют при температуре 37 ± 1 °С в течение 24 - 48 ч.
После инкубирования чашки с посевами просматривают и отмечают рост характерных колоний.
На среде ПАЛ листерий через 24 часа инкубации образуют мелкие серовато-желтые колонии с черным ореолом диаметром от 1 до 2 мм. Посторонняя кокковая микрофлора образует выпуклые колонии лимонно-желтого цвета диаметром от 1 до 4 мм, окруженные слабым (или без него) покраснением питательной среды.
При появлении сплошного роста листерий проводят пересев бактериологической петлей из зон наибольшего почернения среды штрихами на поверхность двух чашек Петри с агаром ПАЛ для получения изолированных колоний.
При отсутствии роста характерных колоний листерий на агаре ПАЛ исследование прекращают и делают заключение об отсутствии Listeria monocytogenes в исследуемой пробе продукта.
УСЛОВИЯ И СРОКИ ХРАНЕНИЯ:
Срок годности питательной среды в прохладном, защищённом от света месте в герметично укупоренном флаконе - 6 месяцев.
Не вскрытый флакон с селективной добавкой хранится в рефрижераторе при температуре до 8 О С в течение года.
Раствор селективной добавки хранится при 2 - 8 О С в течение 4 суток.
Чашки Петри с разлитой в них средой хранятся не более 22 суток в защищенном от света месте и при температуре не выше 8 О С.
Агар для идентификации листерий (ПАЛКАМ) с добавкой FD061 используют для селективного выделения и идентификации видов Listeria .
Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 69,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить до полного растворения среды. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50 0 С и асептически внести растворенное в воде содержимое 2 флаконов с селективной добавкой (PALCAM) для листерий ( FD061 ). Тщательно перемешать и разлить среду в стерильные чашки Петри.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: хлорид лития ядовит. Избегать прикосновения и вдыхания паров. При попадании на кожу немедленно смыть большим количеством воды.
Принцип и оценка результата:
Агар для идентификации листерий (PALCAM агар), также известный как Полимиксин (Polymyxin) – Акрифлавин (Acriflavine) – Литий (Lithium-chloride) – Цефтазидим (Ceftazidime) Эскулин (Esculin) – Маннит (Mannitol) агар, был предложен Van Netten с соавт. (1). Рекомендуется для выделения листерий из пищевых продуктов.
Среда является высоко селективной ввиду наличия в ней хлорида лития, цефтазидима, полимиксина В и акрифлавина. PALCAM агар - дифференциально-диагностическая среда, в которой используются 2 индикаторные системы: с эскулином и маннитом.
Listeria monocytogenes гидролизует эскулин на эскулетин и глюкозу. Реагируя с цитратом железа, эскулетин образует коричнево-черный комплекс, что приводит к потемнению среды вокруг колоний. Листерии не ферментируют маннит, поэтому сбраживающие маннит энтерококки и стафилококки формируют цветные колонии (от красного до желтого). Микроаэрофильные условия ограничивают рост аэробов, подобных представителям родов Bacillus и Pseudomonas .
Введение в состав среды яичного желтка (2,5%) способствует восстановлению поврежденных клеток (2). Добавление среды с кровью поверх PALCAM агара позволяет дифференцировать и подсчитать количество гемолитических листерий (3).
В зависимости от типа анализируемой пробы перед высевом на PALCAM агар должно быть проведено обогащение в том или ином бульоне для селективного обогащения.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий светло-розовый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,3% агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Готовая среда имеет красную окраску, прозрачна, со слегка опалесцирующей поверхностью.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (6,9 % вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 48 ч при 35 °С.
|
Штаммы микроорганизмов (АТСС) |
Рост |
Характеристика колоний |
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для бактериологических исследований
«Питательный агар для выделения листерий (Среда ПАЛ)»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «Питательный агар для выделения листерий (Среда ПАЛ)» предназначен для выделения листерий из клинического материала и пищевых продуктов при их бактериологическом исследовании.
2. характеристика НАБОРА
Набор реагентов состоит из одной банки со средой ПАЛ и 5 флаконов с селективной добавкой (СД). *)
Среда ПАЛ представляет собой мелкодисперсный порошок светло-желтого цвета, который получают смешиванием сухих компонентов. Порошок гигроскопичен, светочувствителен.
СД представляет собой мелкодисперсный порошок розового цвета. Порошок гигроскопичен, светочувствителен.
Среда ПАЛ выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г, СД во флаконах по 0,045 г.
2.1. Принцип действия
Выделение листерий основано на их способности гидролизовать эскулин с образованием эскулетина, который в присутствии ионов железа образует коричнево-черный комплекс, что приводит к потемнению среды вокруг колоний. Ингибиторы подавляют рост сопутствующей микрофлоры.
2.2. Состав
Среда ПАЛ, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбной муки ……………… | |
Пептон ………………………………………………………. | |
Панкреатический гидролизат казеина (ПГК) ……………… | |
Дрожжевой экстракт………………….……………………… | |
Литий хлористый …................................................................ | |
Эскулин ……………..……………………………………….. | |
Железо (III) лимонноаммиачное зеленое или | |
Натрий хлористый ………..…………………………………. | |
Натрий углекислый …………………………………………. | |
Агар микробиологический ……............................................. |
Состав СД, г/л:
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Набор реагентов обеспечивает рост листерий не позднее 48 ч инкубации при температуре (37±1) °С и подавляет рост эшерихий, протеев и стафилококков.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
· Термостат, обеспечивающий температуру 37 °С
· Автоклав
· Пипетки стеклянные, позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
· Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
· Чашки Петри
· Вода дистиллированная
· Воронки стеклянные
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Объекты исследований в клинической, санитарной и пищевой микробиологии.
7. Проведение АНАЛИЗа
7.1. Приготовление среды ПАЛ.
Препарат в количестве, указанном на этикетке, тщательно размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 3 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.
7.1.1 Приготовление среды ПАЛ с селективной добавкой.
Содержимое флакона с селективной добавкой растворяют в 5 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и вносят в стерильную, охлажденную до температуры 50-55 °С среду ПАЛ из расчета 5 мл на 1 л среды.
Готовая среда в чашках прозрачная желто-зеленого цвета.
Готовую среду, разлитую в чашки Петри, можно использовать в течение 7 суток при температуре хранения 2-8 °С.
7.2. Взятие, посев исследуемого материала проводят в соответствии с
ГОСТ Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes», МУК 4.2.1122-02 «Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах».
7.3. Исследуемый материал засевают соответственно на две чашки Петри со средой ПАЛ и стерильным шпателем распределяют взвесь по поверхности среды. Инкубируют при температуре (37±1) ° С не более 48 ч.
8. УЧЕТ И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учет результатов проводят не позднее 48 ч инкубации посевов при температуре (37±1) ° С, визуально учитывая наличие и характер роста.
Колонии L. monocytogenes – мелкие, круглые, серо-желтого цвета, диаметром
0,4-1,2 мм с образованием вокруг колоний черной зоны.
Колонии L. ivanovi – мелкие, круглые, серо-желтого цвета, диаметром 0,2-1,0 мм с образованием вокруг колоний черной зоны.
Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее чем в трех повторностях.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Набор реагентов необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.
Срок годности набора реагентов: среды ПАЛ – 2 года, СД - не менее срока годности среды. Набор с истекшим сроком годности использованию не подлежит.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
По вопросам, касающимся качества набора реагентов «Питательный агар для выделения листерий (среда ПАЛ)» в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовиОболенск, Московская обл ., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии»,
*) Возможен выпуск набора реагентов в комплектации по требованию заказчика
Введение
Мы стремимся уважать информацию личного характера, касающуюся посетителей нашего сайта. В настоящей Политике конфиденциальности разъясняются некоторые из мер, которые мы предпринимаем для защиты Вашей частной жизни.
Конфиденциальность информации личного характера
"Информация личного характера" обозначает любую информацию, которая может быть использована для идентификации личности, например, фамилия или адрес электронной почты.
Использование информации частного характера.
Информация личного характера, полученная через наш сайт, используется нами, среди прочего, для целей регистрирования пользователей, для поддержки работы и совершенствования нашего сайта, отслеживания политики и статистики пользования сайтом, а также в целях, разрешенных вами.
Раскрытие информации частного характера.
Мы нанимаем другие компании или связаны с компаниями, которые по нашему поручению предоставляют услуги, такие как обработка и доставка информации, размещение информации на данном сайте, доставка содержания и услуг, предоставляемых настоящим сайтом, выполнение статистического анализа. Чтобы эти компании могли предоставлять эти услуги, мы можем сообщать им информацию личного характера, однако им будет разрешено получать только ту информацию личного характера, которая необходима им для предоставления услуг. Они обязаны соблюдать конфиденциальность этой информации, и им запрещено использовать ее в иных целях.
Мы можем использовать или раскрывать Ваши личные данные и по иным причинам, в том числе, если мы считаем, что это необходимо в целях выполнения требований закона или решений суда, для защиты наших прав или собственности, защиты личной безопасности пользователей нашего сайта или представителей широкой общественности, в целях расследования или принятия мер в отношении незаконной или предполагаемой незаконной деятельности, в связи с корпоративными сделками, такими как разукрупнение, слияние, консолидация, продажа активов или в маловероятном случае банкротства, или в иных целях в соответствии с Вашим согласием.
Мы не будем продавать, предоставлять на правах аренды или лизинга наши списки пользователей с адресами электронной почты третьим сторонам.
Доступ к информации личного характера.
Если после предоставления информации на данный сайт, Вы решите, что Вы не хотите, чтобы Ваша персональная информация использовалась в каких-либо целях, связавшись с нами по следующему адресу: [email protected].
Наша практика в отношении информации неличного характера.
Мы можем собирать информацию неличного характера о Вашем посещении сайта, в том числе просматриваемые вами страницы, выбираемые вами ссылки, а также другие действия в связи с Вашим использованием нашего сайта. Кроме того, мы можем собирать определенную стандартную информацию, которую Ваш браузер направляет на любой посещаемый вами сайт, такую как Ваш IP-адрес, тип браузера и язык, время, проведенное на сайте, и адрес соответствующего веб-сайта.
Использование закладок (cookies).
Файл cookie - это небольшой текстовый файл, размещаемый на Вашем твердом диске нашим сервером. Cookies содержат информацию, которая позже может быть нами прочитана. Никакие данные, собранные нами таким путем, не могут быть использованы для идентификации посетителя сайта. Не могут cookies использоваться и для запуска программ или для заражения Вашего компьютера вирусами. Мы используем cookies в целях контроля использования нашего сайта, сбора информации неличного характера о наших пользователях, сохранения Ваших предпочтений и другой информации на Вашем компьютере с тем, чтобы сэкономить Ваше время за счет снятия необходимости многократно вводить одну и ту же информацию, а также в целях отображения Вашего персонализированного содержания в ходе Ваших последующих посещений нашего сайта. Эта информация также используется для статистических исследований, направленных на корректировку содержания в соответствии с предпочтениями пользователей.
Агрегированная информация.
Мы можем объединять в неидентифицируемом формате предоставляемую вами личную информацию и личную информацию, предоставляемую другими пользователями, создавая таким образом агрегированные данные. Мы планируем анализировать данные агрегированного характера в основном в целях отслеживания групповых тенденций. Мы не увязываем агрегированные данные о пользователях с информацией личного характера, поэтому агрегированные данные не могут использоваться для установления связи с вами или Вашей идентификации. Вместо фактических имен в процессе создания агрегированных данных и анализа мы будем использовать имена пользователей. В статистических целях и в целях отслеживания групповых тенденций анонимные агрегированные данные могут предоставляться другим компаниям, с которыми мы взаимодействуем.
Изменения, вносимые в настоящее Заявление о конфиденциальности.
Мы сохраняeм за собой право время от времени вносить изменения или дополнения в настоящую Политику конфиденциальности - частично или полностью. Мы призываем Вас периодически перечитывать нашу Политику конфиденциальности с тем, чтобы быть информированными относительно того, как мы защищаем Вашу личную информацию. С последним вариантом Политики конфиденциальности можно ознакомиться путем нажатия на гипертекстовую ссылку "Политика конфиденциальности", находящуюся в нижней части домашней страницы данного сайта. Во многих случаях, при внесении изменений в Политику конфиденциальности, мы также изменяем и дату, проставленную в начале текста Политики конфиденциальности, однако других уведомлений об изменениях мы можем вам не направлять. Однако, если речь идет о существенных изменениях, мы уведомим Вас, либо разместив предварительное заметное объявление о таких изменениях, либо непосредственно направив вам уведомление по электронной почте. Продолжение использования вами данного сайта и выход на него означает Ваше согласие с такими изменениями.
Связь с нами. Если у Вас возникли какие-либо вопросы или предложения по поводу нашего положения о конфиденциальности, пожалуйста, свяжитесь с нами по следующему адресу: [email protected].
